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Kromasil技术支持Q&A---第二弹!!!

发布日期:2019-01-25 作者:谱科 点击:

4.如何监测色谱柱的性能变化?

建议按照产品包装盒内附带的方法测试柱效。注意保持测试条件一致,进样量不超过下表所示数值:


柱内径/mm

进样量/µg

2.1

2

4.6

10

10.0

50

21.2

225

 

为达到标准水平的塔板数,减少柱外体积非常重要。如在进样器和色谱柱之间,以及色谱柱和检测器之间正确设置管路连接。


5. 如何清洗和再生色谱柱?

柱压升高、保留时间改变、柱效下降,这些现象都在提示柱床内或者固定相表面有吸附物存在。一般来说按照正确的清洗步骤即可解决问题。需要注意的是,大多数情况下越早清洗(再生)效果越好。

强吸附性物质经常会集中在柱头,许多情况下反向冲洗有利于色谱柱清洗。值得指出的是,装填效果好的色谱柱不会因为逆流操作而降低性能。


反相(疏水固定相)

色谱柱内的沉积物通常以表面吸附或沉淀的形式存在。



【注1】若冲洗效果依旧不佳,可以使用乙醇/1%乙酸水溶液=50/50,以不超过10倍柱体积进行冲洗

再生操作步骤:

1) 针对杂质选择合适的溶剂和比例。在不确定杂质成分的情况下,可以将其作为强极性物质/离子化合物来处理。

2) 降低流速(正常流速的10%),选择反相模式并小幅度升高柱温(<40℃),冲洗量上限为10倍柱体积。

3) 柱压异常时,选择在常用流速下检查柱压变化。

4) 若无好转,则使用适用于带正电荷极性物质以及大分子吸附物的冲洗条件。如果使用十二烷基磺酸钠溶液作为冲洗液,事后需用纯四氢呋喃,二甲基甲酰胺或者乙腈对色谱柱做彻底冲洗。

5) 如果问题依然存在,请联系Kromasil技术支持团队。


正相(极性固定相)

极性固定相,特别是裸硅胶填料,极性物质的强吸附现象是非常常见的。在正相条件下,强极性杂质不能被洗脱下来,但可以使用高比例质子溶剂,视情况也可以加一定量的酸进行冲洗。

如果样品保留时间出现前后不一致,首先检查固定相-水的平衡状态。使用纯疏水溶剂作为流动相会逐渐使固定相“干化”,从而导致保留时间改变,这对于纯硅胶填料尤其如此。

再生操作步骤

1) 使用中等极性有机溶剂,例如四氢呋喃,来平衡色谱柱

2在低流速(正常流速的1/10)下使用醇类(甲醇)进行冲洗,并适当添加酸性组分(1-5%乙酸或者甲酸),冲洗量不超过10倍柱体积。

3如果问题依然存在,则使用醇水混合物并适量添加酸性组分(盐酸、乙酸等),参照步骤2进行操作。

4若冲洗效果不佳,按如下顺序依次冲洗色谱柱:0.5-1.5%氨水;0.5-1.5%酸性水溶液(盐酸、乙酸);纯水;醇类;四氢呋喃;流动相。

5若冲洗效果仍旧不佳,请联系Kromasil技术支持团队。

选择极性较强的溶剂作为流动相,特别对于裸硅胶填料来说,清洗过后需要较长时间来稳定色谱系统的工作状态,这是由于硅胶基质-水的平衡状态被打破。


6. 如何配置具有缓冲能力的流动相?

含有缓冲成分的流动相有以下两种配置方法:

1) 在与有机相混合前完成包括pH调节在内的所有配置过程。

2) 在缓冲溶液和有机相混合之后调节溶液pH值。

在水溶液体系中pH是一个很容易确定的参数,但是在含有机相的体系中,pH值或质子浓度就不容易准确测量。


因此建议在配制缓冲溶液的同时调节pH值,之后使用0.4微米滤膜过滤后再同有机相混合。需注意以下几点:

· pKa值两侧±1范围内是最有效的缓冲区域,以此为参考选择正确的缓冲系统。

· 如需将高浓度缓冲溶液同有机相混合,请考虑缓冲盐析出的可能性。

· 使用0.4微米滤膜对缓冲溶液进行预先过滤。

· 注意纯水相缓冲溶液中细菌和真菌的滋生。

加入有机相后,溶液pH值通常会发生变化,无机缓冲体系(例如磷酸盐)的pH值会有所上升,而有机缓冲体系(例如乙酸)pH值则会有所下降。

举例:pH值7.6的磷酸缓冲液内加入40%甲醇后pH值上升至8.5




Kromasil品牌

Kromasil是Nouryon旗下高效化学品著名品牌,是全球领先的高性能硅胶基质填料和液相色谱柱生产商。Kromasil高性能多孔球形硅胶基质填料可广泛应用于胰岛素及其类似物、比伐卢定、利拉鲁肽、胸腺法新、达托霉素、EPO等蛋白、多肽及小分子药物等的分离纯化。30年来,Kromasil的经营理念始终是:为制药行业提供以硅胶为基质的、高性价比的、用于医药分离纯化的色谱填料和用于药物分析的液相色谱柱。

Kromasil,一以贯之,创新向前。


                                          公司简介

郑州谱科商贸有限公司成立于2008年,是专注于销售实验室使用的科研教学仪器供应商,同时为广大的科学工作者提供各种色谱试剂,配件耗材及标准品


  本公司技术力量雄厚,管理水平先进,主要经营分析仪器,通用实验设备,成套设备,化工产品等,广泛服务于国内高校科研、教学、卫生防疫、食品加工、石油、化工、制药、环保、商检、医疗等各企事业单位。目前已经是多家国内外知名品牌区域代理和经销商,主要品牌有:美国Waters、美国安捷伦、日本岛津、美国热电、美国CRS、瑞士梅特勒、丹麦Foss、艾本德、HACH、PE、美国Talboys、默克密理博、J.T.Baker、MACRON、瑞典Kromasil、贝克曼、上海乐枫、中科美菱、上海天美、上海美谱达、浙江福立、北京六一、天津拓普、北京创新通恒、上海仪电、中兴伟业。


  公司以优异的品质,良好的信誉,完美的售后服务立足市场。公司以人为本,全体员工始终奉行“诚信、务实、开拓、创新”的企业精神。

  公司全体人员为满足用户的需要进行售前、售中、售后服务,追求的宗旨是:“您的满意,我们的追求” ,公司愿与社会各界诚信合作,共同发展。





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