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操作指南-Kromasil工业纯化填料装填指南

发布日期:2017-12-26 作者:郑州谱科 点击:

  在DAC(动态轴向压缩柱)内装填Kromasil填料的指导说明


  目的:


  所有工艺开发通常都在内径为4.6mm的预装分析柱或内径为10毫米的预装半制备柱上进行,因为这样做除去节约溶剂和宝贵的样品外,还相对省时省力。Kromasil的填料及预装柱产品由于批次生产的大规模性以及批次之间极好的稳定性,在小口径预装柱上优化的条件完全可以在大口径柱或DAC柱上重现,所以完全不需要在大的预装柱上进行工艺开发。然而,如果需要将色谱规模放大到非常可观的纯化制备上,则建议在中等大小的色谱柱或DAC柱上进行条件验证,以确保在大规格设备上能复制整个纯化过程。当规模放大到内径为80-100厘米的色谱柱级别,相信没有人想要有意外发生!


  关键点:


  1.装柱速度:在一定的柱压下进行装柱,迅速的装柱速度是确保获得高柱效的一个重要因素。经过观察和实践,控制整个柱床在30秒到1分钟之内完成压缩,通常能获得最高的柱效。装柱的速度通常和溶剂的粘度相关,因此,我们不建议使用高粘度的溶剂(纯的IPA)等来装柱,而一般会使用乙醇或者乙醇/异丙醇的混合溶剂,这样能达到较好的效果。


  2.筛板:另外一个非常重要的方面是筛板。最理想的筛板是编织的,它非常容易清洗,并且能够提供理想的流体分布。烧结的筛板容易堵,流体分布不均匀,不易清洗。如果使用的不是新的筛板,请务必确认是否清洗干净。


  推荐用于填料匀浆的溶剂


  下表是装填DAC柱子时候推荐使用的溶剂

色谱柱,Kromasil

  填料匀浆:


  对于给定的柱长,我们可以通过装填密度计算出所需要的填料量,然后根据填料量计算出所需的溶剂,匀浆时,一般每Kg填料至少需要2L溶剂,实际计算时候需要考虑填料的总孔隙率和余量。匀浆时最好使用DAC厂家配备的专用设备来进行,当然也可以使用烧杯、搅拌器等来进行。请务必要缓缓地向溶剂中添加填料,以使得硅胶填料在溶剂中分散,搅拌5-10分钟后,填料分散均匀即可装柱。


  色谱柱装填:


  在装填开始前,需确保传输管的直径足够大。以内径为5cm的色谱柱为例,至少使用2mm内径(1/8外径)的出口管,而实际运行时则选用小号的溶剂传输管(1mm内径)。如果使用更大规格的色谱柱,则需按比例放大。充分均匀后的填料匀浆倒入或泵入色谱柱腔,快速拧紧柱盖(不让硅胶层静置太久。硅胶填料沉降引发的问题在大尺寸微球上表现得更为突出)。一旦柱盖就位,柱床开始加压,通常在70-100巴之间进行柱床的压缩,整个柱床的压缩过程应控制在30秒至1分钟内完成(匀浆粘度在1cP时候)。


  色谱柱柱效测试:


  柱子在使用前务必进行柱效测试,测试时,请确保色谱系统已经得到很好的优化(非常小的死体积),推荐使用定量环进样,对于10微米填料的DAC柱子,其柱效至少应该达到40000理论塔板数/米。测试的标准样品,推荐用苯乙酮,甲苯(反相柱)。


相关标签:色谱柱,Kromasil

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